本发明提供一种具有降脂活性的小肽、制备方法及其应用，属于生物技术领域。该具有降脂活性的小肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供所述小肽的制备方法，包括如下步骤：（1）将泥鳅蛋白采用蛋白酶酶解，得到酶解产物；（2）取所述酶解产物采用超滤膜分离，取分子量小于3 kDa的组分；（3）将所述分子量小于3 kDa的组分经葡聚糖凝胶Sephadex G‑15过滤分离，得到所述小肽。本发明小肽，来源于泥鳅蛋白，具有安全性高、高效、来源广泛的特点。