本发明公开了一种用于鉴定米象和玉米象的试剂盒及其检测方法，属于生物检测鉴定技术领域，试剂盒包括以下两对引物对中的至少一对：引物对1由序列1和序列2两条单链DNA组成，序列1:5'-TTGATTACTTCCACCCTCC-3'，序列2:5'-AAGTATAGTGATTGCTCCT-3'；所述引物对2由序列3和序列4两条单链DNA组成，序列3:5'-TTATTAGTTACGAAAGAGGA-3',序列4:5'-ATCAAAGGGATGTAGGAGAA-3'；鉴定米象和玉米象的方法，具体步骤如下：提取米象或玉米象的基因组DNA，将基因组DNA置于-20°C下；以基因组DNA为模板，分别对引物对1和引物对2进行PCR扩增；将PCR扩增产物分别进行琼脂糖凝胶电泳检测，在凝胶成像系统中观察并成像分析。本发明中的鉴定方法可以快速准确地鉴定出米象和玉米象，为害虫防治技术的合理选择提供依据。