本发明提供用于制备细菌素durancin GL的重组菌、制备方法及应用，涉及微生物生物技术领域。所述重组菌携带由细菌素durancin GL、纯化标签和酶切位点相连形成的融合蛋白的编码基因。制备细菌素durancin GL方法如下，诱导重组菌表达融合蛋白，破碎得到裂解液，离心取上清液，采用HisTrap HP柱和GSTrap 4B柱分离或者采用GSTrap 4B柱分离，收集洗脱峰，采用肠激酶酶解，除去纯化标签，得到细菌素durancin GL。本发明重组菌构建方便，能够高效表达重组细菌素durancin GL，通过亲和色谱进行高效分离，水解酶切位点后得到具有活性的细菌素durancin GL。