本发明提供革兰氏阳性菌菌影的制备方法及其应用，属于微生物学和免疫学领域。所述菌影的制备方法，包括：在革兰氏阳性菌悬液中加入 NaOH、SDS和 CaCO；在 30-40℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤后制成重悬液A；在所述重悬液A中加入HzO，在30-40℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤后制成重悬液B；将重悬液B在20-30℃条件下孵育，离心，收集沉淀，洗涤，得到革兰氏阳性菌菌影。本发明利用简单化学试剂就可以快速、高效制备革兰氏阳性菌菌影，显著降低了生产成本。由于单增李斯特菌菌影保留了细菌结构的完整性,免疫后能够产生针对单增李斯特菌的抗体，从而筛选到能够高效、快速检测该细菌的抗体。